REVISTA  
JUVENTUD Y CIENCIA SOLIDARIA:  
En el camino de la investigación  
Evaluación de tres formulaciones para  
la inducción de organogénesis a partir  
de hojas de orquídea  
Amanda Martina Togra Fereño  
Mi nombre es Amanda Martina Togra  
Fereño, tengo 17 años de edad y estudió en  
la Unidad Educativa Agronómico Salesiano.  
Me encanta leer libros, escuchar música y  
bailar danza folclórica. También me gusta  
crear nuevas experiencias y viajar a nuevos  
lugares. Lo más importante para mí es mi  
familia.  
Resumen  
La proliferación de plantas a través del cultivo in  
vitro constituye una herramienta esencial en la biotec-  
nología, particularmente en la generación de plántulas  
a partir de secciones vegetales, que no se reproducen  
con facilidad por métodos convencionales. Por ello,  
el presente proyecto se desarrolló con el objetivo de  
evaluar tres formulaciones de medios de cultivo para  
provocar el crecimiento de plántulas de dos variedades  
de phalaenopsis (Albufeira - White Apple) a partir  
de hojas mediante diferentes concentraciones de hor-  
monas y con una correcta incubación en condiciones  
controladas.  
Palabras clave: cultivo in vitro, hojas, orquídeas,  
phalaenopsis, plántulas.  
Explicación del tema  
Las orquídeas son plantas monocotiledóneas que  
pertenecen a la familia Orchidaceae. Se estima que  
tienen entre 25 y 35.000 especies caracterizadas por  
sus diferentes formas, colores o aromas. No obstante,  
la pérdida de orquídeas endémicas y silvestres se ha  
visto amenazada por el comercio ilegal en donde pese  
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Juventud y Ciencia Solidaria:  
a tener leyes vigentes que prohíben esta práctica, las tanto del material vegetal como de los instrumentos y  
plantas se continúan recolectando y perjudicando di- superficies de trabajo. Asimismo, los operarios deben  
rectamente la estabilidad, disponibilidad y abundancia utilizar el equipo de protección personal correspondi-  
de dicho recurso. Esto, como se indica en [1] genera en ente —mandil, guantes, mascari- lla y cofia— a fin  
el ecosistema un desequilibrio e incluso la desaparición de mantener condiciones de asepsia durante todo el  
de poblaciones. Además, una condición biológica im- procedimiento experimental.  
portante que limita la propagación de las orquídeas es  
la no presencia de reservas nutricionales que permita la  
fácil germinación y multiplicación junto al embrión [2].  
Por lo que, es importante proponer estrategias que  
busquen la conservación, con la necesidad de generar  
investigación, conocimiento y estandarización de pro-  
cesos de propagación en ambientes controlados [3].  
Una de las estrategias empleadas para la propa-  
gación de plantas de orquídeas en condiciones contro-  
ladas es el cultivo in vitro, técnica de reproducción  
que permite obtener ejemplares en tiempos reducidos  
y en cantidades considerables. En [4] señalan que la  
organogénesis es una herramienta biotecnológica ori-  
entada a regenerar plantas a partir de una porción de  
tejido vegetal mediante el uso de reguladores de crec-  
imiento. Sin embargo, en [5] destacan que su efectivi-  
dad depende del tipo de corte, la posición del explante,  
la concentración de citoquininas y las condiciones fisi-  
coquímicas del medio. Por lo tanto, el presente estudio  
tiene como objetivo evaluar la eficiencia de tres for-  
mulaciones en la regeneración in vitro de plántulas a  
partir de hojas de orquídea.  
La generación de plántulas a través de la organogé-  
nesis sigue un protocolo de diferentes pasos:  
1. Desarrollo de los medios de cultivo, los cuales con-  
tienen todos los nutrientes necesarios para que el  
explante (porción de tejido a utilizar como ma-  
terial vegetal a experimentar) actúe de acuerdo  
al propósito requerido.  
2. Los reactivos previamente se pesan en una balan-  
za de acuerdo a las formulaciones previstas, para  
ser colocadas en un Erlenmeyer junto con agua  
destilada.  
3. Colocación de las hormonas con sumo cuidado  
y de una forma lenta para que pueda disolverse  
completamente con las sales minerales y la saca-  
rosa.  
4. Medición del pH con las tirillas de papel hasta  
obtener un valor entre 5.7 a 5.8.  
5. Colocación del agente gelificante (Agar Agar)  
para luego ser sellado con algodón y papel de  
aluminio y llevado a la autoclave durante 15  
minutos a 120ºC  
El trabajo experimental se llevó a cabo en el  
Laboratorio de Meristemas de la Unidad Educativa  
Agronómico Salesiano e inició con la preparación de  
los medios de cultivo. La metodología empleada se  
basó en diversos autores, tales como [6–8], quienes rea-  
lizaron estudios sobre diferentes especies de orquídeas  
6. Finalmente se dispensa en las cajas de Petri den-  
tro de la cámara de flujo laminar.  
mediante el método de organogénesis in vitro. Además,  
Es importante recalcar que, los medios contenían  
entre los materiales utilizados se destaca el uso de hor- Bencilaminopurina (BAP), agua de coco (AC) y ácido  
monas como citoquininas y auxinas, con el propósito 2,4-diclorofenoxiacético (2,4 D) como reguladores de  
de inducir la formación de brotes. Para garantizar la crecimiento, estos se colocaron en diferentes concentra-  
efectividad del proceso de cultivo in vitro, es impre- ciones detalladas en la siguiente tabla en donde LB1:  
scindible evitar cualquier tipo de contaminación. Por Laboratorio Meristemas 1, LB2: Laboratorio Meris-  
esta razón, se lleva a cabo una desinfección rigurosa temas 2:  
Una vez que se tiene los medios de cultivo esteriliza- de las dos variedades de orquídeas en cuadrados de  
dos, se procede con la siembra de los explantes. El corte aproximadamente tres a cinco cm de lado, (véase en  
para estos se desarrolla de las hojas de mayor tamaño la Figura 1). Luego se disponen cinco hojas por cada  
En el camino de la investigación  
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Tabla 1. Tratamientos evaluados de medios de cultivo para el brotamiento en hojas de orquídeas, expuestos en ml.  
Tratamiento Formulación BAP 2-4 D AC  
T1  
T2  
T3  
LB1  
MS 1/2  
LB2  
10  
2
5
40  
2
5
30  
una en las cajas de Petri con la ayuda de una pinza  
quirúrgica. Este proceso se repite para las tres formu-  
laciones.  
Figura 3. Posibles respuestas de los explantes en los  
medios de cultivo  
Fuente: Autora  
Finalmente, el material trabajado se colocó en el  
área de incubación, debidamente rotulado con su res-  
pectivo nombre y fecha de producción. Asimismo, se  
registró la cantidad de explantes utilizados y se man-  
tuvo una temperatura constante entre 23 °C y 26 °C,  
con una humedad relativa del 60 % al 80 %. Además,  
fue necesario garantizar la oscuridad del entorno para  
favorecer la acción de las hormonas en los cortes realiza-  
dos en las hojas, lo que permitió observar dos posibles  
respuestas en el proceso de regeneración (véase Figura  
4).  
Figura 1. Diagramación del Corte de la hoja a utilizar  
Fuente: Autora  
Para finalizar, las cajas de Petri se cierran con  
papel plástico, se extrae todo y se procede a limpiar  
el área de trabajo y los materiales empleados. Este  
procedimiento se puede observar en la Figura 2.  
Figura 4. Presencia de hongos en el tratamiento 3  
Fuente: Autora  
Transcurridas 24 y 72 horas, se procedió a evaluar  
la presencia de contaminación en los tres tratamien-  
tos, evidenciándose su ausencia en todos los casos. Sin  
embargo, al cabo de 38 días se observó contaminación  
fúngica en dos de los tratamientos. Posteriormente, se  
registró la contaminación y oxidación —manifestada  
como pardeamiento del explante— en la totalidad del  
tratamiento 3 (véanse Tablas 2 y 3).  
Figura 2. Desarrollo de siembra de explantes en medios  
de cultivo  
Fuente: Autora  
A: Difusión de alcohol al material a utilizar, B: Corte de  
explantes, C: Colocación de explantes en medio de cultivo,  
D: Etiquetado (nombre, fecha, medio, número de  
explantes)  
     
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Tabla 2. Porcentaje de contaminación de la variedad Albufeira  
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3  
Contaminación  
Variedad: Albufeira  
% Contaminación  
Contaminación  
15 explantes  
33.33%  
Contaminación  
15 explantes  
33.33%  
Contaminación  
15 explantes  
100%  
Tabla 3. Porcentaje de contaminación en la variedad White Apple  
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3  
Contaminación  
Variedad: White Apple  
% Contaminación  
Contaminación  
15 explantes  
0%  
Contaminación  
15 explantes  
0%  
Contaminación  
15 explantes  
66.66%  
En el tratamiento 1, transcurridos 40 días después  
Los nuevos brotes se observan inicialmente como  
de la siembra, se obtuvieron resultados satisfactorios, pequeñas circunferencias transparentes alrededor de la  
evidenciándose el desarrollo de plántulas en el 60 % de hoja, las cuales posteriormente adquieren una tonali-  
los explantes correspondientes a la variedad Albufeira dad verde claro, indicando el inicio del desarrollo de  
y en el 20 % de los explantes de la variedad White brotes. Para una mejor comprensión del proceso des-  
Apple.  
crito, consúltese la Figura 6.  
Figura 5. Porcentaje de brotamiento para las dos variedades con los tres tratamientos  
Fuente: Autora  
Figura 6. Resultados del tratamiento 1 con explantes procedentes de Albufeira  
Fuente: Autora  
     
En el camino de la investigación  
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L. E. Vanegas M., “Inducción de organogénesis in  
vitro con 6-bencilaminopurina en Cattleya trianae  
Linden & Rchb.f.” Revista U.D.C.A Actualidad &  
Divulgación Científica, vol. 22, no. 2, Sep. 2019.  
[Online]. Available: https://shorturl.at/J3Z6K  
Conclusiones  
Al finalizar este proyecto experimental, se puede con-  
cluir que la organogénesis o cultivo in vitro constituye  
una técnica exitosa y eficiente para la obtención de  
brotes, así como un método factible para la multi-  
plicación controlada de orquídeas. No obstante, para  
alcanzar resultados satisfactorios, esta metodología de-  
pende de diversos factores, entre ellos el uso adecuado  
de hormonas, la correcta selección del material vegetal  
y el mantenimiento de condiciones ambientales y de  
asepsia apropiadas.  
[3] K. Bustamante, S. P. Rocha, S. E. Sharry, M. P.  
Guerra, and F. O. Niella, “Organogénesis directa  
e indirecta a partir de segmentos nodales, hojas  
y raíces de Eugenia involucrata DC,” Revista  
de la Facultad de Agronomía, vol. 121, no.  
Especial 2, p. 102, Nov. 2022. [Online]. Available:  
https://shorturl.at/171W2  
Por otro lado, es importante señalar que, a pesar de  
las interrupciones eléctricas ocasionadas por el estiaje  
nacional y de los episodios de contaminación que re-  
trasaron el desarrollo del proyecto, la técnica demostró  
tener un alto potencial, ya que se observaron respues-  
tas significativas —dos positivas y una negativa— en  
los tres tratamientos aplicados a las dos variedades de  
orquídeas Phalaenopsis. La variedad Albufeira mostró  
un mejor desempeño que White Apple, pues al exponer  
los explantes a las diferentes concentraciones de hor-  
monas y agua de coco presentó un mayor porcentaje de  
brotamiento de plántulas, mientras que White Apple  
evidenció un nivel más alto de oxidación. Finalmente,  
se concluye que el tratamiento LB2 + 5BAP + 5 2,4D  
+ 30AC (Tratamiento 3) no es recomendable, ya que,  
al desarrollarse en un medio líquido, favorece la pro-  
liferación de contaminantes y provoca la muerte del  
explante.  
[4] E. F. George, M. A. Hall, and G.-J. De Klerk,  
Plant propagation by tissue culture: volume 1. the  
background. Springer Science & Business Media,  
2007, vol. 1.  
[5] C. C. Blackburn and N. R. Manley, “Develop-  
ing a new paradigm for thymus organogenesis,”  
Nature Reviews Immunology, vol. 4, no. 4,  
pp. 278–289, Apr. 2004. [Online]. Available:  
https://shorturl.at/7wJl7  
[6] R. A. Ríos-Villanueva, G. C. Sánchez-López,  
O. Gregorio-Ramírez, C. A. Dávila-Figueroa,  
E. Villalobos-Amador, A. Santiago-Martínez,  
M. M. Camacho-Martínez, and G. González-  
Adame, “ESTABLECIMIENTO DE CULTIVOS  
IN VITRO DE PLANTAS MODELO, PLAN-  
TAS MEDICINALES DE LA SIERRA JUÁREZ  
Y ORQUÍDEAS DE VALLE NACIONAL, OAX-  
ACA.”  
Referencia  
[1] A. Emeterio-Lara, V. Palma-Linares, L. Vázquez-  
García, and J. Mejía-Carranza, “USOS Y COMER-  
CIALIZACIÓN DE ORQUÍDEAS SILVESTRES  
EN LA REGIÓN SUR DEL ESTADO DE  
MÉXICO,” Polibotánica, vol. 0, no. 42, Jul. 2016.  
[Online]. Available: https://shorturl.at/UPnJS  
[7] M. Sugiyama, “Organogenesis in vitro,” Current  
opinion in plant biology, vol. 2, no. 1, pp. 61–64,  
1999, iSBN: 1369-5266 Publisher: Elsevier.  
[8] J. Shin, S. Bae, and P. J. Seo, “De novo  
shoot organogenesis during plant regenera-  
tion,” Journal of Experimental Botany, vol. 71,  
no. 1, pp. 63–72, Jan. 2020. [Online]. Available:  
https://shorturl.at/ZbGDw  
[2] A. I. Gil C., C. A. Araiza C, L. M. Castillo T.,  
L. E. Salgado D., L. Branda Sánchez, and